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黄曲霉毒素B1(AFB1)ELISA检测试剂盒说明书

2011-03-01 中国食品网 中食网 1077


一、概要
黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物,它们具有很强的致癌性,主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液,动物饲料相关的产品中。其中黄曲霉毒素B1(AFB1)的毒性、致癌性、污染频率均居于首位。而使用黄曲霉毒素B1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素B1残留。参考国家标准GB/T 5009.22-2003。
黄曲霉毒素B1检测试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代真菌毒素检测产品,操作时间短于60min,能最大限度地减少操作误差和工作强度。

二、试验原理
黄曲霉毒素B1检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被黄曲霉毒素B1抗原,样本中黄曲霉毒素B1和此抗原竞争黄曲霉毒素B1抗体,同时黄曲霉毒素B1抗体与酶标二抗相结合,经TMB底物显色,样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素B1成负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中黄曲霉毒素B1的含量。

三、适用范围
黄曲霉毒素B1检测试剂盒可定性、定量检测玉米、大米、麦类、豆类、花生、花生酱、饲料、食用油等样本中的黄曲霉毒素B1。

四、测定前应须知:
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温(20~25℃)。
2、使用之后立即将所有试剂放回2~8℃。
3、在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。
5、黄曲霉毒素B1可致癌,应戴手套操作。

五、操作步骤:
1、将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温(20~25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板,将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封,保存于2~8℃。不要冷冻。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本:加标准品/样本50ml到对应的微孔中,加入AFB1酶标物50ml/孔,再加入AFB1抗试剂50ml/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应30min。
6、洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗涤工作液300ml/孔,充分洗涤5次,每次间隔30s,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。
7、显色:加入底物液A液50ml/孔,再加底物液B液50ml/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境反应15~20min。
8、测定:加入终止液50ml/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测,请在5min内读完数据),测定每孔OD值。(若无酶标仪,则不加终止液用目测法可进行判定)。

六、检测方法灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度:
0.1ppb
回收率:
花生、玉米等谷物:90±15%
曲奇饼干:90±15%
蜂蜜蛋糕:85±15%
饲料:85±15%
食用油:90±15%
酱油:85±15%
醋:90±15%
葡萄酒:90±15%
干黄酱:80%±10%
火锅底料:95%±10%
精密度:
试剂盒的变异系数均小于10%

七、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温(20~25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒;也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂,掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2~8℃,不要冷冻,将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
8、在加入底物液A液和底物液B液后,一般显色时间为15~20min即可。若颜色较浅,可延长反应时间到30min(或更长)。反之,则减短反应时间。
9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象,请加热溶解后使用。
10、该试剂盒最佳反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

八、贮藏条件及保存期
贮藏条件:保存试剂盒于2~8℃。
保存期:该产品有效期为12个月。


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