ELISA检测试剂盒使用指南 |
步骤 |
常见问题 |
解决方案 |
实验准备 |
1 加样器不准确;尤其10ul以下的加样器,对结果影响极大; |
1 校正加样器;10ul以下加样器最好采用进口产品(芬兰、法国等); |
2 保温设备不良; |
2 仔细校正温度到37℃,水浴箱为佳; |
3 洗涤用水不规范。 |
3 必须使用去离子水或蒸馏水,不得用自来水、矿泉水等。 |
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4 认真阅读使用说明书。 |
样品加样 |
1 加样不准确; |
1 加样时一定要仔细。加样后,再检查,以防漏加、错加。 |
2 没有混匀。 |
2 加样后,反复抽吸3次混匀,防止血清聚集孔底,导致非特异性吸附。 |
洗涤 |
洗涤不彻底 |
1 每次注水洗涤,应静止30秒钟; |
2 选用吸水纸作为衬垫,每次洗涤后扣干孔内水分; |
3 可选用塑料洗涤瓶。 |
加酶反应 |
漏加 |
滴加后,认真检查各孔 |
结果判断 |
1 包括阴性对照孔在内,各孔显色普遍偏深; |
1 可能是洗涤不充分;加样过量;温育时间过长温度过高;按说明书重新操作。如无改善,可与生产厂家联系; |
2 包括阳性对照在内,各孔均无显色; |
2 可能是漏加样本或酶液;温育时间过短温度过低;试剂保存不当活性下降;按说明书重新操作。如无改善,可与生产厂家联系; |
3 阳性对照不显色,而其它样本显色正常; |
3 阳性对照漏加、错加或失效。重新操作。如无改善,可与厂家联系,索要对照品; |
4 有些标本显色不深,判断阳性困难。 |
4 重新操作。最好使用酶标仪,测定光吸收度,按P/N值标准判断。 |
试剂保存 |
保存不规范 |
一定要在2-8℃存放。不得过高,也不得冻存(冻存后,酶液将失效)。 |
对照品 |
对照品为冻干品 |
按对照管标示,加入相应体积的去离子水或蒸馏水复溶,充分溶解混匀。可按说明书使用。 |