鲤科疱疹病毒III型是疱疹病毒科中具有强致性和强传染性的成员,对该病毒的检测方法主要是酶联免疫吸附测定法、免疫组化法、聚合酶链式反应法(PCR法)和环介导恒温扩增法(LAMP),这些方法由于在操作简便性、检测灵敏度、检测准确性和现场可操作性等方面存在的问题而使用受限。
近期,美国俄勒冈州立大学的科学家公布了一种检测鲤科疱疹病毒III型的方法——重组酶聚合酶扩增法并结合核酸试纸检测,大大降低了操作的复杂性,提高了检测的灵敏度和准确性。该方法只需对样品进行简单的预处理,在37℃条件下完成病毒DNA的扩增,并使用核酸检测试纸对产物进行检测,全部过程只需30分钟,可检出10个拷贝数的病毒基因组DNA,阳性检出率高于荧光定量PCR,真正实现了塘边检测。
重组酶聚合酶扩增技术是Piepenburg等于2006年首先提出的一种新型的核酸恒温扩增技术,主要依赖于重组酶、单链DNA结合蛋白和链置换DNA聚合酶这三种酶,最适宜反应温度在37℃~42℃之间,无需复杂的样品前处理和核酸变性,可扩增DNA和RNA,一般可在10分钟之内获得可检出水平的扩增产物,同时可实现数据的实时读取和多个模板的同步检测,被认为可真正替代PCR的技术。由于该方法是在恒温下完成核酸的扩增,结合核酸检测试纸,可在养殖现场推广使用,具有广阔的应用前景。 黄冠军