【中文别名】:葛根提取物
【英文名称】:KUDZU ROOT Extract
【使用部位】:豆科植物柴葛[Pueraria lobata(Willd.)Ohwi]和甘葛藤(Pueraria thomsonii Benth.)的干燥根
【主要成分】:葛根素、葛根异黄酮
【化学成分】:其根中含多种黄酮类成分,主要活性成分为大豆素(daidzein)、大豆甙(daidzin)、葛根素(puerarin)、葛根素-7-木糖甙(puerarin-7-xyloside)等。葛根素是野葛的提取物,异名葛根黄素,分子式为C21H20O9,分子量为416.37,在甲醇—醋酸中为白色针状晶体。
【原料来源】:日本产葛根主产于长野、岐阜县。中国产于湖南、河南、广东、广西、浙江、四川、台湾等省。韩国也产。多年生落叶藤本,长达10m,全株被黄褐色粗毛。块根圆柱状,肥厚,外皮灰黄色,内部粉质,纤维性很强。生于山坡草丛路旁及疏林中较阴湿的地方。秋、冬二季采挖,趁鲜切成厚片或小块。
【存储条件】:避光储存于密封容器中【含量测定】:
葛根素检测方法:HPLC法(药典)
色谱条件
色谱柱:C18(250×4.6)mm 5um
流动相:甲醇-水(25:75)
检测波长:250nm
对照品溶液的制备取葛根素对照品适量,精密称定,加30%乙醇制成每lml含80ug的溶液,即得。
供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约0.lg,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入30%乙醇50ml,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用30%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul,注入液相色谱仪,测定,即得。
【含量测定】:葛根素检测方法:HPLC法
试剂和材料
甲醇:优级纯
无水乙醇:分析纯
冰乙酸:优级纯
36%乙酸:用冰乙酸与水按9:16的比例配制。
葛根素标准品:纯度≥95%
葛根素标准储备溶液(2.00mg/mL):准确称取0.02g葛根素标准品(精确至0.0001g),用70%甲醇溶解并定容至10mL,混匀(此标准储备溶液4℃冰箱中可保存7d)。
葛根素标准使用液(200ug/mL):准确吸取1.00mL葛根素标准储备溶于10mL容量瓶中,用70%甲醇定容至刻度,混匀(此标准储备溶液在4℃冰箱中可保存7d)。
D101大孔吸附树脂:树脂用70%乙醇浸泡24h,使其充分溶胀,反复用去离子水冲洗,将乙醇洗净后装入层析柱上,柱高10cm。
层析柱:长15cm,内径1.0cm。
2.仪器和设备
高效液相色谱仪:附紫外检测器。
超声波清洗器。
离心机:4000r/min
3.色谱条件
色谱柱:ODS C18(250×4.6)mm 5um
流动相:甲醇+36%乙酸+水=25+3+72
流速:0.6mL/min
检测波长:247nm
进样体积:10ul
4.试样处理
单一葛根提取物制成的试样:根据试样含量,称取0.50g-1.00g试样(精确至0.001g),加适量70%甲醇,于超声波清洗器中超声提取20min冷却至室温,再用70%甲醇定容至10mL,混匀,静置,上清液经0.45um微孔滤膜过滤后,待液相色谱分析。多种植物提取物制成的试样:根据试样含量,准确称取0.50g-1.00g试样(精确至0.001g),加适量水溶解,并于超声波清洗器中超声20min,冷却至室温后用水定容至10mL,混匀,4000r/min离心5min。取1mL上清液上大孔吸附树脂层析柱,用约40mL水以1mL/min淋洗杂质,再用50mL70%甲醇洗脱葛根素,将洗脱液置于沸水浴蒸发近干,用70%甲醇将其溶解并定容至1mL,过0.45um滤膜后待高效液相色谱用。
5.标准曲线制备
分别吸取葛根素标准使用液,用70%甲醇稀释并定容的浓度分别为5ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、30ug/mL、40ug/mL、50ug/mL的标准系列。
6.色谱分析
在给定的仪器条件下进标准溶液系列和试样净化液进行液相色谱仪分析,以保留时间定性,以峰高或峰面积定量。
7.结果计算
试样中葛根素的含量按下式进行计算:
X=
式中:
X-试样中葛根素的含量,单位为克每千克(g/kg);
c-由标准曲线求得进样液中葛根素的浓度,单位为微克每毫升(ug/mL);
V-试样定容体积,单位为毫升(mL);
m-试样质量,单位为克(g)。
计算结果保留两位有效数字。
8 色谱图
图1 葛根素标准色谱图
图2 多种植物提取物制成的试样色谱图