为进一步探讨香菇菌多糖的作用机理,我们进行了香菇菌多糖对免疫功能的影响及抗肿瘤实验,现总结如下:
一、材料与方法:
1、香菇菌多糖注射液:针剂,每支2ml/4mg,;
2、实验动物:昆明种小鼠,兰州生物制品研究所动物室提供,C57/BL小鼠由甘肃省肿瘤研究所动物室提供。二组小鼠雌雄兼有,体重为17-22克;
3、瘤株:肝癌(Hep),脑瘤(B22),艾氏腹水癌(EC),肉瘤180(S180)分别由上海药物所和北京药物所引来,在甘肃省肿瘤研究所动物室传代半年以上。
4、试剂及其他材料:植物血凝素(PHA),环磷酰胺,肝素钠注射液,Hanks溶液,戊二醛混合液,活小牛血清,绵羊红细胞悬液,鸡红细胞悬液,瑞姬染液,甲醇及生理盐水等。
5、给药剂量及途径:小鼠随机分组,试验组每日皮下注射香菇菌多糖注射0.2ml/0.4ml,连续5天停药1天,于第7天作实验观察各项免疫指标。同时设空白对照组,盐水对照组,PHA对照组。抗肿瘤试验给药剂量为6.6mg/kg,腹腔注射(ip),连续给药10天,并设环磷酰胺为阳性对照。
6、实验方法:巨噬细胞吞噬功能的测定按参考文献进行;E玫瑰花结形成实验按参考文献进行;淋巴细胞转化实验按体内法进行。抗肿瘤实验,按1979年全国抗抗癌协会制定“抗肿瘤药物体内筛选规程”进行。
二、实验结果:1、香菇菌多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响:见表1。从表1结果可见,香菇菌多糖组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数与空白对照组及生理盐水对照组有显著差异。说明香菇菌多糖可以提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能。
表1 香菇菌多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响
组别
|
X±SX(n)
|
T
|
P
|
空白对照组
|
21.70±0.497(10)
|
14.359
|
<0.001
|
生理盐水对照组
|
24.20±0.917(10)
|
15.614
|
<0.001
|
香菇菌多糖组
|
42.75±0.770(10)
|
|
|
2、香菇菌多糖对小鼠E玫瑰花结形成的影响:见表2。从表2说明,香菇菌多糖能增强小鼠外周血E玫瑰花结的形成,与空白对照及生理盐水对照组相比,有显著差异。
表2 香菇菌多糖对小鼠E玫瑰花结形成的影响
组别
|
X±SX(n)
|
T
|
P
|
空白对照组
|
36.00±0.874(11)
|
15.623
|
<0.001
|
生理盐水对照组
|
24.20±1.129(11)
|
22.850
|
<0.001
|
香菇菌多糖组
|
42.75±0.684(11)
|
|
|
3、香菇菌多糖对淋巴细胞转化的影响,见表3。香菇菌多糖能促进小鼠体内淋巴细胞转化,与空白对照及生理盐水对照组比较有显著差异。与PHA组比较,无显著性意义。说明小鼠体内淋巴细胞转化率的提高,是香菇菌多糖作用的结果,并非是PHA刺激作用的结果。
表3 香菇菌多糖对小鼠淋巴细胞转化的影响
组别
|
X±SX(n)
|
T
|
P
|
空白对照组
|
19.50±3.36(10)
|
7.228
|
<0.01
|
PHA对照组
|
38.90±2.97(10)
|
1.607
|
<0.05
|
生理盐水对照组
|
30.10±1.79(10)
|
4.067
|
<0.01
|
香菇菌多糖组
|
46.18±3.38(10)
|
|
|
4、香菇菌多糖对小鼠移植瘤Hep及B22等瘤株的作用,见表4。表4表明香菇菌多糖对瘤株B22抑制率为42%,对Hep的抑制率为11.57-43.16%之间,对EC的抑制率为14.80%,S180的抑制率为2%,阳性对照组环磷酰胺对Hep抑制率是65.07%。香菇菌多糖对Hep的抑制率与给药剂量有关,当5-6.6mg/kg时的抑制率在35.78-43.06%之间,剂量增大到10mg/kg对Hep的抑制率为11.57-11.96%。香菇菌多糖组与阳性对照组环磷酰胺(CY)组比较,CY的抑制率更显著,但在实验终了时,香菇菌多糖组小组体重增加,CY组小鼠体重明显减轻。说明香菇菌多糖除对肿瘤细胞的生长有抑制作用外,还有强壮身体的作用。
表4 香菇菌多糖对小鼠移植性肿瘤的作用
样品名称
|
瘤株
|
剂量 |
给途径及次数
|
动物数
|
动物体重/克
|
瘤重(克)/生存天数(天)
|
抑瘤率 |
P
|
备注
|
|||
开始
|
结束
|
开始
|
结束
|
|||||||||
给药/ |
给药/ |
给药/ |
给药/ |
治疗
|
对照
|
|||||||
香
菇
菌
多
糖
|
B22
|
6.6
|
ipX10
|
10/10
|
9/8
|
20.5/20.4
|
25.5/26.0
|
0.478±0.557
|
0.6275±0.638
|
42.24
|
<0.05
|
提前给药5天
|
Hep
|
6.6
|
ipX10
|
10/10
|
8/9
|
20.4/20.4
|
18.0/26.4
|
0.75±0.27
|
1.24±0.41
|
38.42
|
|
|
|
Hep
|
6.6
|
ipX10
|
10/12
|
9/12
|
21.1/25.0
|
23.8/21.9
|
0.65±0.25
|
1.07±0.57
|
39.42
|
<0.05
|
|
|
Hep
|
10
|
ipX10
|
10/15
|
10/13
|
21.4/32.4
|
21.4/23.4
|
0.97±0.21
|
1.10±0.32
|
11.96
|
|
|
|
Hep
|
6.6
|
ipX10
|
10/12
|
10/11
|
22.2/26.3
|
20.8/26.8
|
1.03±0.57
|
2.03±1.11
|
35.78
|
|
停药一周处理
|
|
Hep
|
5.0
|
ipX10
|
10/13
|
9/12
|
23.6/36.6
|
25.6/23.5
|
0.79±0.28
|
1.39±0.59
|
43.06
|
<0.02
|
提前5天给药
|
|
Hep
|
10
|
ipX10
|
10/10
|
8/9
|
23.1/22.7
|
33.5/28.5
|
0.70±0.26
|
0.79±0.25
|
11.57
|
|
|
|
Hep
|
6.6
|
ipX10
|
10/10
|
8/9
|
23.1/22.7
|
33.5/28.5
|
0.85±0.27
|
1.40±0.58
|
39.42
|
|
停药5天处理
|
|
EC
|
5.0
|
ipX10
|
10/13
|
8/10
|
21.6/27.4
|
25.0/26.8
|
0.98±0.53
|
1.16±0.52
|
14.87
|
|
|
|
S180
|
10
|
ipX10
|
10/12
|
9/11
|
21.8/26.2
|
27.0/26.1
|
2.3±1.003
|
2.35±0.95
|
2.0
|
|
|
|
CY
|
Hep
|
30
|
ipX10
|
9/10
|
8/8
|
19.0/19.2
|
17.2/21.0
|
0.388
|
1.112
|
65.07
|
<0.001
|
|
三、讨论
经小鼠免疫功能实验,香菇菌多糖有显著提高巨噬细胞吞噬作用,有显著提高小鼠外周血E玫瑰花形成和体内淋巴细胞转化,表明香菇菌多糖有提高机体免疫力的作用。