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液-固色谱法

2005-10-07 中国食品网 中食网 1155

.原理

-固色谱法是利用各组分在固定相上吸附能力的不同而将它们分离的方法。

当组分随着流动相通过色谱柱中的吸附剂时,组分分子及流动相分子对吸附剂表面的活性中心发生吸附竞争。组分分子对活性中心的竞争能力的大小决定了它们保留值的大小。被活性中心吸附越强的组分分子越不容易被流动相洗脱,k

就大;反之k值就小。组分之间的k值相差越大,分离越容易。

吸附剂吸附能力的强弱与吸附剂的比表面积、物理化学性质、组分分子的结构和组成以及流动相的性质等因素有关。

.固定相

-固吸附色谱所使用的固定相,多数是有吸附活性的吸附剂,常用的有表面多孔型和全多孔微粒型硅胶、氧化铝、分子筛等。

1.表面多孔型:又称薄壳型,是高效液相色谱使用的第一种填料。表面多孔填料的机械强度好,易填充均匀、紧密,渗透性好,表面孔隙浅,传质快,柱效高,分离速度快。其主要缺点是由于比表面积小,柱容量低,允许进样量小。

2.全多孔微粒型:目前广泛使用的有球形和无定形两种,颗粒直径310um,它具有粒度小,比表面积大(100600m2g),孔穴浅,柱效高和柱容量大的优点。

.流动相

实现最佳分离与流动相的选择有关。溶剂的极性是重要的依据。溶剂的极性强弱可用溶剂强度参数e0来衡量。e0越大,表示洗脱剂的极性越强。

吸附色谱流动相的选择原则是极性大的试样需用极性强的洗脱剂,极性弱的试样宜用极性较弱的洗脱剂。实际工作中常用两种或两种以上溶剂按不同比例混合作洗脱剂,以提供合适的溶剂强度和k值,提高分离的选择性。在分离复杂试样时,可进行梯度洗脱,能提高分离效率,改善峰形,加快分析速度。(高效液相色谱法中,流动相选择虽然有一般的指导原则,但主要靠实践经验。)

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