紫外-可见分光光度法应用

*酸碱指示剂离解常数的测定

分光光度法可以测定酸碱离解常数，若为一元弱酸，在溶液中的离解反应为：

HB⇌H⁺+ B^-

若测出[B^-]和[HB]，就可算出K_a。测定时，配制出三份不同pH的HB溶液，一份为强碱性溶液，另一份为强酸性溶液，分别在B^-和HB的吸收峰波长处测定吸光度，由此计算出B^-和HB的摩尔吸光系数。第三份为已知pH值的缓冲液，其pH值在pK_a附近，在测得B^-和HB的总吸光度后用双组分测定的方法算出B^-和HB的浓度，即可计算出弱酸的离解常数。

由pH = pKa

可知，当[B^-]和[HB]相等时：pK_a= pH

若以pH为横坐标，以某波长处测得的不同pH时的A为纵坐标作图，得一条S形曲线，该曲线的中点所对应的pH即为pK值。