卫生部近日汇总公布了《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单》，上海月旭公司从公布的黑名单中统计发现，包括三聚氰胺、苏丹红、孔雀石绿、人工合成色素等都在内。针对这些令人触目惊心的食品添加剂，同时也为食品安全检查和监管工作提供有力的技术支持和保障，上海月旭公司迅速组织相关人员研制出了方便、快速、准确的检测方法，现将LC-MS/MS检测动物组织中β-兴奋剂类药物的方法公布如下：
1. 适用范围
适用于动物组织中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺药物的检测。
2. 提取
将5g动物组织、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸钠溶液置于50 mL离心管中，10000 rpm均质2 min。6000 rpm下离心2 min，将上清液转至另一离心管中。用15 mL乙酸乙酯重复提取一次，合并提取液。
向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的盐酸溶液，涡动1 min，然后再6000 rpm下离心1 min，收集下层水相。重复萃取一次，合并下层水相，用2.5 mol/L NaOH溶液调节pH至5.2，待净化。
3. 净化
活化/平衡：依次向Welchrom? P-SCX（60mg/3mL）（上海月旭提供）中加入3 mL甲醇、3 mL水和3mL 30 mmol/L盐酸溶液，流出液弃去；
上样：将上述提取液加入柱中，流出液弃去；
淋洗：依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，淋洗液弃去，并将小柱抽干；
洗脱：用2×2 mL 5% 氨化甲醇洗脱，收集洗脱液，40℃下氮气吹，50%乙腈复溶，过0.22μm滤膜，待分析；
4. 色谱质谱条件
4.1 色谱条件
色谱柱：Ultimate XB-C18 液相色谱柱（2.1mm* 100 mm, 3 μm）（上海月旭提供）
时间（min） |
流动相A（%） |
流动相B（%） |
0 |
95 |
5 |
3 |
95 |
5 |
5 |
45 |
55 |
10 |
45 |
55 |
10.1 |
95 |
5 |
15.0 |
95 |
5 |
流动相：
A：0.1%甲酸水溶液
B：乙腈
梯度洗脱
流速：0.2 mL/min
进样量： 10 μL
柱温：35 °C
运行时间：12 min
4.2 质谱条件
扫描模式：MRM
离子源：ESI+
毛细管电离电压：3.20 Kv
孔电压（cone）：45 V
电离源温度：100 ℃
脱溶剂温度：300 ℃
锥孔气流速：50 L/Hr
脱溶剂气流速：450 L/Hr
名称 |
母离子 |
子离子 |
孔电压(V) |
碰撞电压(eV) |
驻留时间（ms） |
定量离子对 |
定性离子对 |
盐酸克伦特罗 |
277.2 |
167.8 |
20 |
28 |
100 |
- |
+ |
203.0 |
20 |
16 |
200 |
+ |
- |
||
莱克多巴胺 |
302.17 |
106.8 |
18 |
28 |
100 |
- |
+ |
164.1 |
18 |
14 |
200 |
+ |
- |
||
盐酸克伦特罗-D9 |
288.2 |
209.2 |
22 |
146 |
100 |
+ |
|
莱克多巴胺-D3 |
305.2 |
167.1 |
18 |
14 |
100 |
+ |
5. 结果
回收率和重现性实验
将猪肌肉空白样品经过液液萃取初步处理后，分别添加一定量的标准溶液，添加浓度分别为0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/ kg、每批次内同一浓度做3次平行实验，共3个批次。
添加水平（μg/kg） |
||||||
分析物 |
0.1 |
0.5 |
1.0 |
|||
Recovery (%) |
RSD (%) |
Recovery (%) |
RSD (%) |
Recovery (%) |
RSD (%) |
|
盐酸克伦特罗 |
93.8 |
5.82 |
89.7 |
5.92 |
96.1 |
3.62 |
莱克多巴胺 |
95.3 |
7.43 |
103.5 |
3.42 |
97.4 |
4.55 |