索氏抽提法
巴布科克法和盖勃氏法
(一) 原 理
用浓硫酸溶解乳中的乳糖和蛋白质, 将牛奶中的酪蛋白钙盐转变成可溶性的重硫酸酪蛋白, 脂肪球膜被破坏, 脂肪游离出来, 再利用加热离心, 使脂肪完全迅速分离, 直接读取脂肪层可知被测乳的含脂率。
(二) 适用范围与特点
这两种方法都是测定乳脂肪的标准方法, 适用于鲜乳及乳制品脂肪的测定。但不适合测定含巧克力、糖的食品, 因为硫酸可使巧克力和糖发生炭化，结果误差较大。 改良巴布科克氏法可用于测定风味提取液中芳香油的含量 (AOAC 法 932.11) 及海产品中脂肪 (AOAC 法 964.12) 的含量。
巴布科克氏法和盖勃氏法的原理相似，盖勃氏法较巴布科克法简单快速，多用一种试剂异戊醇。使用异戊醇是为了防止糖炭化。该法在欧洲比在美国使用更为广泛。
(三) 测定方法
l.巴布科克法
(1) 精确吸取 17.6 mL 牛乳于巴布科克氏乳脂瓶中。
(2) 加入硫酸 (相对密度 1.816 ±0.003, 20℃) 17.5mL, 硫酸沿瓶颈壁慢慢倒入, 将瓶颈回旋, 充分混合至无凝块并呈均匀的棕色。
(3) 将乳脂瓶离心 5min (约 1000r / min), 脂肪分离升至瓶颈基部。
(4) 加入热水使脂肪上浮到瓶颈基部, 离心 2min。
(5) 再加入热水使脂肪上浮到 2 或3刻度处，离心 1min。
(6) 置 55～60℃水浴 5min 后, 立即读取脂肪层最高与最低点所占的格数, 即为样品含脂肪的百分率。
2.盖勃氏法
(1) 将 l0 mL 硫酸倒入盖勃氏乳脂瓶中。
(2) 精确吸取 11 mL 牛乳于盖勃氏乳脂瓶中。
(2) 加入 l mL 异戊醇 (相对密度 0.811± 0.002, 20℃,沸程 128～132℃)。
(4) 盖紧塞子，振摇至呈均匀棕色液体, 静置数分钟。
(5) 置于 65～70℃水浴中 5min。
(6) 取出擦干, 调节脂肪柱在刻度内, 放入离心机(800~1000r / min)中离心 5min。
(7) 将乳脂瓶置 65~70℃水浴, 5min 后取出, 立即读数, 即为脂肪的含量。
(四) 说明与讨论
1. 硫酸的浓度要严格遵守规定的要求, 如过浓会使乳炭化成黑色溶液而影响读数; 过稀则不能使酪蛋白完全溶解, 会使测定值偏低或使脂肪层浑浊。
2. 硫酸除可破坏脂肪球膜, 使脂肪游离出来外, 还可增加液体相对密度, 使脂肪容易浮出。
3. 盖勃氏法中所用异戊醇的作用是促使脂肪析出, 并能降低脂肪球的表面张力, 以利于形成连续的脂肪层。
4. l mL 异戊醇应能完全溶于酸中, 但由于质量不纯, 可能有部分析出掺入到油层, 而使结果偏高。
5. 加热 (65~70℃水浴中) 和离心的目的是促使脂肪离析。
6. 罗紫一哥特里法、巴布科克法和盖勃法都是测定乳脂肪的标准分析方法。根据对比研究表明, 前者的准确度较后两者高, 后两者中巴布科克法的准确度比盖勃法的稍高些, 两者差异显著。
酸水解法原理：样品经酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得游离及结合脂肪总量。
酸水解法试剂：盐酸、95％乙醇、乙醚、石油醚、100毫升具塞刻度量筒
酸水解法实验过程：1、样品处理： (1)固体样品：精密称取约2克水，混匀后再加重。毫升盐酸。置于50毫升大试管内，加8毫升；(2)液体样品：称取10.0克，置于50毫升大试管内，加10毫升盐酸。
2、将试管放70-80℃水浴中，每隔5-10分钟以玻璃棒搅拌一次，至样品消化完全为止，约40-50分钟。
3、取出试管，加人10毫升乙醇，混合。冷却后将混合物移于100毫升具塞量筒中，以25毫升乙醚分次洗试管，一并倒人量筒中。待乙醚全部倒入量筒后，加塞振摇1分钟，小心开塞，放出气体，再塞好。静置12分钟，小心开塞，并用石油醚-乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着的脂肪。静置10-20分钟，待上部液体清晰，吸出上清液于已恒重的锥形瓶内，再加5毫升乙醚于具塞量筒内，振摇，静置后，仍将上层乙醚吸出，放入原锥形瓶内。将锥形瓶置水浴上蒸干，置95-105℃烘箱中干燥2小时，取出放入干燥器内冷却0.5小时后称重。
酸水解法计算：
X=(m1-m0)/m2
X：样品中脂肪的含量％；
m1：接受瓶与脂肪的质量，g；
m2：接受瓶的质量，g。
MM_FS_CNG_0390
植物油脂检验杂质测定法
适用范围
本标准适用于商品植物油脂中杂质含量的测定。
说明
植物油脂中的杂质为不溶于石油醚等有机溶剂的残留物。
3.主要试剂和仪器
3.1.主要试剂
抽气泵；
抽气瓶；
安全瓶；
2号玻璃砂芯漏斗；
胶管；
称量皿；
镊子、量筒、玻棒；
天平：感量0.0001g。
3.2.试剂
石油醚（沸程60～90℃）；
95％乙醇；
酸洗石棉；
脱脂棉；
定量滤纸（代替石棉用）等。
4.过程简述
准备抽气装置：用胶管连接抽气泵、安全瓶和抽气瓶。用水将石棉分成粗、细两部分，先用粗的，后用细的石棉铺垫玻璃砂芯漏斗（约3mm厚），先用水沿玻棒倾入漏斗中抽洗，后用少量乙醇和石油醚先后抽洗，待石油醚挥净后，将漏斗送入105℃电烘箱中，烘至前后两次重量差不超过0.001g为止。
抽滤杂质：称取混匀试样15～20g（W）于烧杯中，加入20～25ml石油醚（蓖麻油用95％乙醇），用玻棒搅拌使试样溶解，倾入漏斗中，用石油醚将烧杯中的杂质干净地洗入漏斗内，再用石油醚分数次抽洗杂质，洗至无油迹为止。
烘干杂质：用脱脂棉揩净漏斗外部，在105℃温度下烘至恒重（W1）。
5.结果计算
杂质含量按下列公式计算：
杂质（％）＝
W1
×100
W
式中：W1——杂质重量，g；
W——试样重量，g。
双试验结果允许差不超过0.04％，求其平均数，即为测定结果。测定结果取小数点后第二位。
6.来源：
GB 5529—85
MM_FS_CNG_0386
植物油脂检验磷脂测定法
1.适用范围
本方法适用于商品植物油脂中磷脂的测定。
2.原理概要
油脂中磷脂即由甘油、脂肪酸、磷酸和氨基醇等所组成的复杂的化合物。
3.钼蓝比色法
3.1.主要试剂和仪器
3.1.1.主要试剂
50％氢氧化钾溶液；
盐酸、硫酸、氧化锌、滤纸；
0.015％硫酸联氨溶液；
2.5％钼酸钠稀硫酸溶液：量取140ml硫酸注入300ml水中，摇匀，冷却至室温，加入12.5g钼酸钠，溶解后加水至500ml，摇匀，静置24h备用；
磷标准溶液：称取无水的磷酸二氢钾0.4391g溶于1000ml水中，作为1号液，含磷0.1mg／ml，吸取1号液10ml，加水稀释至100ml，含磷0.01mg／ml，作为2号液，比色用。
3.1.2.仪器
瓷坩埚或石英坩埚；
分光光度计或带塞的50ml比色管；
移液管：5、10ml；
电炉、高温炉；
容量瓶：100、500、1000ml；
表面皿、烧杯、量筒；
恒温水浴锅；
漏斗、坩埚钳、试剂瓶等。
3.2.样品制备
用坩埚称取试样约10g（准确至0.001g），加氧化锌0.5g，先在电炉上加热炭化，然后送入550～600℃的高温炉中灼烧至灰化（白色），灼烧时间约2h，取出坩埚冷却至室温，用热盐酸（1∶1）10ml溶解灰分，并加热微沸5min，将溶解液过滤注入100ml容量瓶中，用热水冲洗坩埚和滤纸，待滤液冷却至室温后，用50％氢氧化钾溶液中和至出现混浊，缓慢滴加盐酸使氧化锌沉淀全部溶解后，再滴2滴，最后用水稀释至刻度，摇匀。
3.3.过程简述
3.3.1.绘制标准曲线：取5只50ml比色管，编成1，2，4，6，8五个号码，按号码顺序分别注入磷标准2号液1，2，4，6，8ml，再按顺序分别加水9，8，6，4，2ml。接着向5只管内各加0.015％硫酸联氨溶液8.0ml；各加钼酸钠稀硫酸溶液2.0ml，加塞、摇匀。去塞，将5只管置于正在沸腾的水浴中加热10min，取出冷却至室温，用水稀释至50ml，充分摇匀，经10min后，用分光光度计在波长650nm下，用3cm液槽，用水调整零点，分别测定消化值。以消化值为纵坐标，以磷量（0.01、0.02、0.04、0.06、0.08mg）为横坐标绘制标准曲线。
3.3.2.比色：用移液管吸取被测液10ml注入50ml比色管中，加入0.015％硫酸联氨8.0ml，加2.0ml钼酸钠稀硫酸溶液，加塞，摇匀。去塞，将比色管置于正在沸腾的水浴中加热10min，取出冷却至室温，用水稀释至50ml，充分摇匀，经10min后，用分光光度计在波长650nm下，用3cm液槽，用水调整零点，测定消光值。
3.4.结果计算
根据被测液的消光值，从标准曲线查得磷量（P），按公式（1）计算磷脂含量：
磷脂（％）＝P×
V2
×26.31×
100
……………………（1）
V1
W×1000
式中：P——标准曲线查得的磷量，mg；
V2——样品灰化后稀释的体积，ml；
V1——比色时所取的被测液体积，ml；
26.31——每毫克磷相当于磷脂的毫克数；
W——试样重量，g。
3.5.允许差
双试验结果允许差不超过0.04％，求其平均数，即为测定结果。测定结果取小数点后第二位。
4.重量法
4.1.主要试剂和仪器
4.1.1.主要试剂
丙酮。
4.1.2.仪器
玻璃漏斗、漏斗架；
烧杯：100ml；
锥形瓶、滤纸等。
4.2.过程简述
取混匀的样品约100ml，加热约90℃时进行过滤。用烧杯称取试样25g，加热至80℃，加水2～2.5ml，充分搅拌使之水化，在室温下静置过夜，或进行离心沉淀，倾出上层清液，用已知恒重的滤纸（或用抽气装置抽滤）进行过滤，待滤液全部滤出后，用冷的丙酮把杯内残留的沉淀冲洗入滤纸中，继续用丙酮洗涤滤纸和沉淀，洗至无油迹为止。待滤纸和沉淀上的丙酮挥尽后，送入105℃烘箱中烘至恒重。
4.3.结果计算
重量法测定磷脂含量按公式（2）计算：
磷脂（％）＝
W1
×100………………………………………（2）
W
式中：W1——沉淀物重量，g；
W——试样重量，g。
4.4.允许差
双试验结果允许差不超过0.04％，求其平均数，即为测定结果。测定结果取小数点后第二位。
5.来源：
中国国家标准：GB5537—85
MM_FS_CNG_0387
植物油脂检验含皂量测定法
1．适用范围
本方法适用于商品植物油脂含皂量的测定。
2．原理概要
油脂中的含皂量，即油脂经过碱炼后，残留在油脂中的皂化物数量（以油酸钠计）。
3.主要试剂
石油醚：沸点60～90℃；
95％中性乙醇；
0.2％甲基红乙醇溶液；
0.02N硫酸溶液；
无水碳酸钠。
4.过程简述
称取混匀试样约10g（W），注入干燥的锥形瓶中，加入乙醇10ml和石油醚60ml，摇动，使试样溶解后，缓慢加入80℃的蒸馏水80ml，振摇使成乳状，滴入3滴甲基红指示剂，趁热逐滴加入0.02mol/L（1/2H2SO4）硫酸溶液，每加一滴振摇一次，滴至分层下的溶液显出微红色为止。
5.结果计算
油脂含皂量按下列公式计算：
含皂量（％）＝
V×N×0.304
×100
W
式中：V—— 滴定用去的硫酸溶液体积，ml；
N—— 硫酸溶液的（1/2H2SO4）摩尔浓度；
W——试样重量，g；
0.304—— 每毫克摩尔（1/2H2SO4）硫酸相当于油酸钠的克数。
两次试验结果允许差不超过0.02％，求其平均数，即为测定结果。测定结果取小数点后第二位。
6.来源：
中国国家标准：GB5533—85