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实验室常用缓冲液、试剂的配制方法

2013-04-15 中国食品网 中食网 724
#1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)#

组份浓度:1 M Tris-HCl

配制量:1 L

配制方法:

1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

#10&timeTE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)#

组份浓度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA

配制量:1 L

配制方法:

1. 量取下列溶液,置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,均匀混合。

3. 将溶液定容至1 L后,高温高压灭菌。

4. 室温保存。

#1.5 M Tris-HCl (pH8.8)#

组份浓度:1.5 M Tris-HCl

配制量:1 L

配制方法:

1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

#3 M 醋酸钠(pH5.2)#

组份浓度:3M 醋酸钠

配制量:100ml

配制方法:

1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的去离子水搅拌溶解

2.加入冰醋酸调节pH值至5.2

3.加去离子水将溶液定容至100ml

4高温高压灭菌后,室温保存。

#Buffer#

组份浓度:137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4

配制量:1 L

配制方法:

1. 称量下列试剂,置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

4. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:上述 Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

#10 M 醋酸铵#

组份浓度:10 M 醋酸铵

配制量:100 ml

配制方法:

1. 称量77.1 g醋酸铵置于100~200 ml烧杯中,加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。

3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。

4. 密封瓶口于室温保存。

注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。

#Tris-HCl平衡苯酚#

配制方法:

1. 使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2. 操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。

3. 苯酚平衡:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下:

① 液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。

② 加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色,有助于方便识别有机相。

③ 加入等体积的1 M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。

④ 重复操作步骤③。

⑤ 加入等体积的0.1 M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。

⑥ 重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。

⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)

配制方法:

1. 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2. 配制方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24 : 1)混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

#10% (W/V) SDS#

组份浓度:10% (W/V)SDS

配制量:100ml

配制方法:

1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中,加入约80ml的去离子水,68℃加入溶解

2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2

3.将溶液定容至100ml后,室温保存。

#2 N NaOH#

组份浓度:2 N NaOH

配制量:100 ml

配制方法:

1. 量取80 ml去离子水置于100~200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。

2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。

3. 待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100 ml。

4. 将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。

#2.5 N HCl#

组份浓度:2.5 N HCl

配制量:100 ml

配制方法:

1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸(11.6 N),均匀混合。

2. 室温保存。

#5 M NaCl#

组份浓度:5 M NaCl

配制量:1 L

配制方法:

1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中,加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至1 L后,适量分成小份。

3. 高温高压灭菌后,4℃保存。

#20% (W/V) Glucose#

组份浓度:20% (W/V) Glucose

配制量:100 ml

配制方法:

1. 称取20 g Glucose置于100~200 ml烧杯中,加入约80 ml的去离子水后,搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。

3. 高温高压灭菌后,4℃保存。

#Solution I(质粒提取用)#

组份浓度:25 mM Tris-HCl(pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose

配制量:1 L

配制方法:

1. 量取下列溶液,置于1 L烧杯中。

2. 高温高压灭菌后,4℃保存。

3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。

#Solution II(质粒提取用)#

组份浓度:200mM NaOH,1%(W/V)SDS

配制量:500ml

配制方法:

1.量取下列溶液,置于500ml烧杯中

10% SD 50ml

2N NaOH50ml

2.加灭菌水定容至500ml,充分混匀

3.室温保存,此溶液保存时间最好不要超过一个月

注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌

#Solution III(质粒提取用)#

组份浓度:3 M KOAc, 5 M CH3COOH

配制量:500 ml

配制方法:

1. 称量下列试剂,置于500 ml烧杯中。

2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。

3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。

4. 高温高压灭菌后,4℃保存。

#0.5 M EDTA(pH8.0)#

组份浓度:0.5 M EDTA

配制量:1 L

配制方法:

1. 称取186.1 g Na2EDTA·2H2O,置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌。

3. 用NaOH调节pH值至8.0(约20 g NaOH)。

注意:pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解。

4. 加去离子水将溶液定容至1 L。

5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。

6. 室温保存。

#1 M DTT#

组份浓度:1 M DTT

配制量:20 ml

配制方法:

1. 称取3.09 g DTT,加入到50 ml塑料离心管内。

2. 加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。

3. 适量分成小份后,-20℃保存。

#10 mM ATP#

组份浓度:10 mM ATP

配制量:20 ml

配制方法:

1. 称取121 mg Na2ATmiddot;3H2O,加入到50 ml塑料离心管内。

2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0),搅拌溶解。

3. 适量分成小份后,-20℃保存。


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